简介
原理
补体依赖细胞毒实验的基本原理是细胞性抗体与特异性抗原（IgG1,2,3或IgM）结合激活补体活化的精典途径细胞膜损伤，补体活化形成的攻膜复合体可导致细胞膜损伤，损伤细胞膜私密性改变，而使细胞外低渗的液体步入细胞，造成细胞水肿死亡，可以通过显微镜计数死细胞的多少，来判定补体依赖的细胞毒活性。
用途
补体依赖细胞毒实验可用于该实验可拿来测量细胞表面特异性的抗体，也可用于测量制备的抗原是否具有细胞毒性（并非所有抗原与抗体结合后都能激活补体，尤其是单克隆抗原）、淋巴细胞亚群的鉴别、组织相容性抗体的检测与分型、选择性除去某一细胞亚群、单克隆抗原的筛选与鉴别。
材料与仪器
器材：解剖器材、平皿、试管、滴管、载玻片、盖玻片、显微镜、水浴箱。
试剂：
①补体：新鲜家兔混和血浆，分装后保存于-20℃，用时以Hanks液进行适当稀释；
②抗Thy-1血浆、PBS、0.5%锥虫乱菊液;
步骤
补体依赖细胞毒实验（以抗Thy-1血浆与大鼠的胸腺或脾T淋巴细胞互相作用，通过激活补体对胸腺或脾的T细胞进行杀伤为示例）的基本过程可分为如下几步：
（一）靶细胞的制备
A.大鼠骨折处决细胞膜损伤，取出肝脏和胸腺（分别坐落右边头部和肋骨柄后）分别放在富含3mlPBS平皿中，将3-4层纱布覆盖到组织上，用直头钳子固定组织，用管件钳子轻压组织，将其碾磨成单细胞悬液，之后用滴管隔著纱布将细胞悬液吸出，调细胞含量至5x106/ml。
注意事项：鼠处决要迅速、彻底，避免流血过多，不利于胸腺的分离，亦可事先摘眼珠放血。
（二）加样
A.分别向阴性管中加入100μl靶细胞＋100μl抗Thy-1的McAb，阳性对照管则加入100μl靶细胞＋100μlPBS，同时向各管中各加入100μl补体。轻轻振荡混匀后，置37℃水浴中孵育40分钟。
注意事项：靶细胞须要新鲜分离获得，否则长时间放置可引起细胞自然死亡而影响结果；靶细胞含量要适中，过低或过高均会影响实验结果。补体要新鲜采集，需三只以上的家兔的血浆混和。
（三）观察
A.细胞孵育后，取出试管，于每管中各加入50μl锥虫乱菊液，振摇混匀后立刻取出染色的细胞悬液滴1滴到玻片上，用盖玻片盖上，在显微镜下观察。
锥虫蓝拒染法测量细胞活力具体方式：取一定量细胞悬液离心1000r/min，5分钟，弃上清，沉淀细胞用PBS或无血浆培养基重悬后，与适量0.5％锥虫蓝染色液混和，温度下孵育3分钟。于3～5分钟内，将混和液滴于计数板上置显微镜下观察计数，分别计数未着色细胞（活细胞）和着色细胞（死细胞）。根据下边公式估算细胞活力：
注意事项：锥虫蓝染色时间及计数时间不要太长，因锥虫蓝本身具有一定的毒性作用，可致细胞死亡。
（四）结果判断
按下式估算细胞毒百分比：
注意事项
1.大鼠处决要迅速、彻底，避免流血过多，不利于胸腺的分离，亦可事先摘眼珠放血。
2.靶细胞须要新鲜分离获得，否则长时间放置可引起细胞自然死亡而影响结果。
3.靶细胞含量要适中，过低或过高均会影响实验结果。
4.补体要新鲜采集，需三只以上的家兔的血浆混和。
5.锥虫蓝染色时间及计数时间不要太长，因锥虫蓝本身具有一定的毒性作用，可致细胞死亡。